對有硝化作用的污水處理系統的出水進行BOD5測定時，由于其中含有很多硝化細菌，測定結果中就包含了氨氮等含氮物質的需氧量。
測定BOD5時水樣稀釋法分一般稀釋法和直接稀釋法兩種，其中一般稀釋法需要使用的稀釋水或接種稀釋水數量較多。
稀釋倍數過大或過小，可導致5d耗氧量太少或太多，超出正常耗氧范圍使實驗失敗。而由于BOD5的測定周期很長，一旦出現此類情況，就無法以原樣補測。因此，必須十分重視稀釋倍數的確定。
稀釋水的質量對BOD5的測定結果的準確性意義重大，因此要求稀釋水空白5日耗氧必須小于0.2mg/L，最好能控制在0.1mg/L以下，接種稀釋水5日耗氧應在0.3~1.0mg/L之間
BOD5的測定是一個生物化學耗氧過程，水樣中的微生物以水中有機物為營養生長繁殖的同時，分解有機物并消耗了水中的溶解氧
BOD5測定通常采用標準稀釋與接種法(GB 7488--87)，其操作為，經中和及除去毒性物質并經稀釋后的水樣(必要時加入適量含好氧微生物的接種液)置入培養瓶中
